枯草桿菌怎樣培養
培養方法如下:
1、取受體菌接種於BY培養液中,37攝氏度培養到對數生長早中期。此時OD620應在0.4左右,培養時間約為4到5小時。
2、將培養後的菌液離心,棄去上清液,再用生長培養基(GM液)洗菌一次,然後將菌體細胞重新懸浮在與BY培養液等體積的GM液中。37攝氏度繼續振盪培養到對數生長後期。此時OD620應在0.6至0.9,培養時間約為3到5小時。
3、以1比10的比例將GM液中培養的菌液稀釋於轉化培養基(TM液)中。即取菌液0.2ml加入1、8mlTM液中,在20乘以150mm的試管中,37攝氏度振盪培養90分鐘。
4、加入供體質粒,至最終濃度1ug每毫升,於20乘以150mm的試管中,37攝氏度振盪培養30分鐘。
5、取200ul塗布抗性選擇平板,37攝氏度培養48小時。
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