RNA提取原理

RNA抽取一般使用Trizol法抽提:

Trizol是一種總RNA抽提試劑，內含異硫氰酸胍等物質，能迅速裂解細胞，抑制細胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進行提取組織或細胞中的RNA。

Trizol作用原理:

在勻質化或溶解樣品中，Trizol試劑可保持RNA的完整性，同時能破壞細胞及溶解細胞成分。加入氯仿離心後，裂解液分層成水相和有機相。RNA存在於水相中。

水相轉移後，RNA通過異丙醇沉澱回收。移去水相後，用乙醇可從中間相沉澱得到DNA，加入異丙醇沉澱可從有機相得到蛋白質。

抽提RNA的使用目的

RNA用於不同的後續實驗，其質量要求不盡相同。

cDNA文庫構建要求RNA完整而無酶反應抑制物殘留；

Northern對RNA完整性要求較高，對酶反應抑制物殘留要求較低；

RT-PCR對RNA完整性要求不太高，但對酶反應抑制物殘留要求嚴格。因此，明確實驗目的是進行後續實驗的首要條件。