體外轉錄的步驟有哪些
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轉錄通常發生在生物體內,如果我們將含有RNA轉錄酶、NTP等條件,在體外無細胞系統中,用DNA作為模板,模仿體內轉錄過程生成RNA,這樣的技術則能夠控制轉錄的基因、轉錄的過程和轉錄後RNA的用途,該技術被稱為體外轉錄。
體外轉錄的步驟如下:
1、 提取cDNA質粒;
2、 線性化質粒;
3、 純化質粒: 加等體積的Tris苯酚氯仿到100微米限制內切酶消化體系,渦旋振盪20秒, 13000克離心5分鐘。上清轉移,加入2倍體積無水乙醇和1比10體積的的
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