退火温度的高低由什麼因素決定
經驗3.17W
退火温度是影響PCR反應特異性的重要因素。
引物與模板復性所需要的退火温度取決於引物的長度、鹼基組成及其濃度。引物長度越短,引物中G+C的含量越低,所需的退火温度越低。雖然降低退火温度可能增加擴增產量,但引物與模板間的錯配現象也會增多,導致非特異性擴增上升。
相反,提高退火温度雖然可以提高反應的特異性,但會引起擴增效率下降,甚至無擴增產物出現。引物的退火温度可以通過Tm=4(G+C)+2(A+T)公式組略估算,一般在算出的Tm值上減去5攝氏度極為較合適反應設計退火温度。
標籤:退火
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